طريقة تحليل البروتين

البروتينات Proteins

التعريف :-
هى عبارة عن مركبات عضوية ذات أوزان جزيئية عالية تحتوى فى تركيبها على
عناصر الكربون والهيدروجين و النيتروجين والأكسوجين و الكبريت أحيانا .
وهى تدخل فى تركيب الأحماض الأمينية
جزئ البروتين :- عبارة عن عدد من الأحماض الأمينية مرتبطة مع بعضها بروابط ببتيدية
الذوبان :- تذوب كل الأحماض الأمينية فى الماء و الأحماض والقلويات المخففة
تنقسم البروتينات الى :- ( بروتينات بسيطة - بروتينات مركبة - بروتينات مشتقة )
- بروتينات بسيطة :- عند تحللها تعطى أحماض أمينية فقط ( مثل الألبيومين / الجلبيولين )
- بروتينات مركبة :- عند تحللها تعطى أحماض أمينية + مركبات غير بروتينية ( مثل بعض الإنزيمات, وبعض الهرمونات )
- بروتينات مشتقة :- هى بروتينات تنتج من تحلل البروتينات البسيطة أو
المركبة ( مثل الببتون و الببتيدات العديدة والثنائيةو الثلاثية)

الكشف عن البروتينات معمليا

إختبار بيرت Biuret :- الإختبار العام للكشف عن البروتينات 0
أساس الأختبار :- تتفاعل أيونات النحاس مع الروابط الببتدية فى جزىء البروتين وتعطى لون بنفسجى 0
المحاليل المستخدمة :- محلول كبريتات النحاس تركيز %1 --- محلول هيدروكسيد الصوديوم @
طريقة الأختبار :نأخذ فى أنبوبة أختبار 2 مللتر من محلول البروتين ثم يضاف
اليها 1مللتر من محلول محلول هيدروكسيد الصوديوم @ + 1مللتر من محلول
كبريتات النحاس تركيز %1 ثم نرج جيدا
المشاهدة :- فى الحالات الإيجابية ( بروتين ) يظهر لون بنفسجى على البارد
فى الحالات السلبية (مادة غيرالبروتين ) لايحدت أى تغير فى اللون0
إختبار التجلط :- للكشف عن الزلال ( الألبيومين)
نأخذ فى أنبوبة إختباركمية من محلول البروتين حوالى ثلثى حجم الانبوبة ثم
نمسك بأمبوبة الأختبارمن الجزء السفلى فى وضع مائل بزاوية 45درجة مع
الموقد ثم نسخن على اللهب المباشر الجزء العلوى من البروتين مع مراعة
تحريك الأمبوبة بشكل دائرى خفيف مع مراعات أن لا يحدث فوران
المشاهدة :-
الحالات الإيجابية ( ألبيومين) تكون عكارة فى الجزء الساخن من الامبوبة
تزيد هذه العكارة بإضافة من 5-3 قطرات من حمض الخليك المخفف(CH3cooH-dil )
5%)
الحالات السلبية (عدم وجود ألبيومين ) لا تتكون اى عكارة بعد التسخين0
إختبار سلفات الآموتيا الشبعة :- للكشف عن الجلاتين
نأخذ فى أنبوبة إختباركمية من محلول البروتين حوالى 5مللتر يضلف اليها كمية مناسبة من محلول سلفات (كبريتات ) الآمونيا المشبعة0
المشاهدة :- فى الحالات الإيجابية ( جلاتين ) يظهر راسب أبيض على البارد
فى الحالات السلبية (مادة غيرالجلاتين ) لايحدت أى تغير